Técnica de PCR en la Chlamydia trachomatis

Tema: Detección de Chlamydia trachomatis por qPCR en tiempo real

Objetivo: Detectar la Chlamydia trachomatis por medio de qPCR en tiempo real en los sacos conjuntivales en recién nacidos por parto normal.

Muestra: Hisopos uretrales o cervicales (cualquier sitio infectado), en este estudio fue de sacos conjuntivales de los recién nacidos.

Tipo de ácido nucleico: ADN de Chlamydia trachomatis.

Extracción: ADN a partir de la muestra para obtener material genético de la bacteria. Previo a la profilaxis ocular, se tomó una muestra de los sacos conjuntivales con un hisopo dacrón estéril y se colocó en un medio de transporte M4ART. Incluyó la lisis celular (rotura de células bacterianas para liberar el ADN), separación del ADN (del resto de componentes) y purificación (eliminación de contaminantes).

Genes a analizar: Los que codifican para proteínas de la membrana externa como outer membrana protein A (ompA) y genes que codifican para la subunidad beta de la RNA polimerasa (rpoB).

Tamaño de pares de bases: Se suelen amplificar segmentos alrededor de 100-400 pb, en este caso se amplificó un fragmento de 24 pb del plásmido críptico de Chlamydia.

Tipo de PCR: qPCR en tiempo real (Reacción en cadena polimerasa cuantitativa).

Pasos

1. Desnaturalización: 94°C por 1 minuto (comúnmente 95° durante 30 seg - 1 min)
2. Hibridación: 55°C por 1 minutos (comúnmente 50-60° durante 30 seg - 1 min)
3. Elongación: 72°C por 2 minutos (comúnmente 72° durante 30 seg - 1 min)

Número de ciclos: 35 ciclos de amplificación (por lo general son de 30 - 40 ciclos).

Tabla 1. Se muestra el grupo de edad materna de los neonatos con resultados positivos para Chlamydia trachomatis por qPCR, indica una mayor frecuencia en mujeres de 14 - 19 años con un 31.5% (6 neonatos). Información obtenida de: https://revistas.uta.edu.ec/erevista/index.php/enfi/article/view/911

Referencia bibliográfica: 

1. Felicita A, Torres N, Achig M. DETECCIÓN DE CHLAMYDIA TRACHOMATIS POR PCR EN TIEMPO REAL, EN RECIÉN NACIDOS EN EL HOSPITAL ISIDRO AYORA, QUITO-ECUADOR. Enfermería Investiga [Internet]. 6 de julio de 2020. [citado el 14 de diciembre de 2023];5(3). Disponible en: https://revistas.uta.edu.ec/erevista/index.php/enfi/article/view/911